尊龙凯时的人结肠腺癌细胞LS1034培养说明书为您提供详细的细胞培养指导，确保您能够顺利进行实验操作。

一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议以1:2比例进行传代

传代情况：每2天换液

备注：建议用无菌离心管收集培养基，留作对比培养，若效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，先培养至良好状态，然后灌满完全培养液并封好瓶口，这样是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（推荐拍摄40x、100x和200x倍的各一张），前三天的照片是重要的售后依据，如果未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打后转移悬液至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清后，将细胞沉淀加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速置入37℃水浴中解冻，待冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管内容物移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，加入5ml完全培养基重悬后接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在贴壁时较为松动，运输过程中可能会发生细胞脱落，属于正常现象。如果脱落较多，请将培养瓶内的培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清作对比培养。然后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后进行消化，最终进行重悬和分瓶传代。

五、售后条款

1）可重发的情况

1. 细胞在运输过程中出现问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发。
2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰冻存发货细胞复苏后24小时内，绝大多数细胞未存活且需提供真实清晰的细胞状态照片，方可重发。
4. 细胞在复苏后出现污染，符合条件的可重发。
5. 如在收到产品7天内提供真实实验结果以鉴定细胞活力，亦可重发。
6. 收到细胞当天及后2-3天需拍照记录，逾期视为产品合格。

2）不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染问题，不予重发。
2. 客户操作不当导致细胞状态不佳，亦不予重发。
3. 不采用推荐的细胞培养体系导致的细胞状态问题，不重发。
4. 细胞状态不佳且未提供细胞培养前三天的照片，不重发。
5. 在培养过程中经其他处理导致的细胞状态不良，不重发。
6. 在收到细胞2天内未通知的，亦不重发。

如您在细胞培养方面有任何疑问或者需求，欢迎联系尊龙凯时，我们将竭诚为您提供支持。