产品简介

衍生化反应主要用于提升目标物质的可检测性，增强检测器对其的响应。在弱碱性溶液中，OPA与3-MPA可以与氨基酸的羰基和氨基发生反应，生成衍生物，并在紫外光的激发下发射出波长更长的荧光。衍生物的荧光强度与其浓度成正比，因此可以用于计算样品中氨基酸的含量。这种方法具有检测速度快、准确性高、灵敏度强以及适用范围广泛等优点。

货号名称：SDK1010氨基酸衍生化试剂盒（OPA法，不含标准品）

规格：25T/50T

储存条件：2-8℃

注：更多信息，请联系网站负责人

组分

实验步骤

1. 流动相A的配制：取适量的超纯水，在瓶内溶解流动相A1、A2和A3。将溶解后的流动相移至1L的容量瓶中，并用适量超纯水清洗流动相瓶壁1-2次，然后将冲洗液移至容量瓶中，以确保试剂的完全溶解。最后，用超纯水定容至1L，混匀，过022μm有机相膜后备用。

2. 流动相B的配制：取超纯水，溶解流动相B，转移至1L容量瓶中，清洗瓶壁1-2次，并将冲洗液移至容量瓶。然后加入400mL的色谱级甲醇和400mL的色谱级Y腈，最后定容至1L。混匀后，过022μm有机相膜以备使用。

3. 超声处理流动相：将配制好的流动相A和B超声处理30分钟，以去除溶剂中的气体，防止色谱柱阻塞，影响实验结果。

4. 标准溶液的配制：取一定量的氨基酸标准品，用01MHCl溶解为100μg/mL或1mM的标准溶液，并过022μm水相膜。

5. 衍生试剂的配制：取60mg试剂一，加入0.5mL试剂二、45mL试剂三和50μL试剂四，混匀并避光备用。此配制量可获得约5mL的衍生化试剂，可进行25次手动衍生，实际操作时可根据需要增减配制量。

6. 色谱仪的设置：激活电脑及液相色谱仪模块（使用FLD检测器），安装C18色谱柱（46×250mm，耐水性≥90%），开启软件并在方法组中设置柱温35℃，流速1mL/min，激发波长（λex）340nm，发射波长（λem）450nm，洗脱程序参照下表设置，走样时间60分钟，并保存方法组。

7. 进样前的准备：需用初始流动相（流动相A:流动相B=90:10）平衡柱子，平衡时间至少为30分钟，待基线稳定后开始进样。

8. 自动衍生或手动衍生：若采用自动衍生操作，吸取氨基酸标准溶液1μL、2μL的衍生试剂、2μL试剂三，混合5次，等待1分钟后进样；若手动操作，则取100μL的氨基酸标准溶液，加入200μL的衍生试剂和200μL的试剂三，涡旋混合后静置1分钟并过022μm有机相膜上样。

9. 空白对照实验：进行实验时，需同时做空白对照，即用等量的01MHCl重复上述步骤，以排除可能的干扰。

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